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Eine einzigartige Kombination von drei Technologien liegt im Mittelpunkt von rqmicros Schnelltestmethode:

Vernetzte Geräte

Actionable data

Point-of-Use Tests

Automatisierte Wasseranalyse

Immunomagnetische Separation

Das CellStream-Instrument von rqmicro isoliert und reinigt Zielzellen über magnetische Partikel auf, die an hochspezifische proprietäre Antikörper gekoppelt sind. Das von rqmicro entwickelte, automatisierte IMS-Verfahren zeichnet sich im Vergleich zu herkömmlichen IMS-Methoden durch einen kontaktfreien, kontinuierlichen Prozess aus, der auf einer mikrofluidischen Einwegkartusche stattfindet. Damit werden eine einfache Handhabung sowie ein geringer Wartungsaufwand garantiert.

Nach einem Filtrationsschritt wird die Probe in einem kleinen Puffervolumen resuspendiert. Danach werden zwei spezifische, von rqmicro entwickelte, Antikörper-Mischungen zugegeben.

Der erste Mix enthält Antikörper, die an magnetische Partikel gebunden sind. Sie binden an die Zielzellen und ermöglichen so die immunomagnetische Separation. Der zweite Mix enthält Antikörper, die an einen Fluoreszenzfarbstoff gebunden sind und damit die Quantifizierung mit dem Durchflusszytometer ermöglichen.

Während der immunomagnetischen Separation im CellStream immobilisiert ein Magnet die an die magnetischen Partikel gebundenen Zielzellen. Gleichzeitig werden mehr als 95% der Begleitflora, die ursprünglich in der Probe vorhanden war, der Abfallfraktion zugeführt. Durch einen Waschschritt erreicht die Probenreinheit bis zu 99%.

Mikrofluidik

rqmicro nutzt das Potenzial der Mikrofluidik, um mittels immunomagnetischer Separation (IMS) eine hocheffiziente Separation und Aufreinigung von Zielzellen aus Proben unterschiedlicher Komplexität durchzuführen. Während die Probe durch einen schmalen Kanal in der mikrofluidischen Kartusche fliesst, werden die Zielzellen isoliert und in sauberer Pufferlösung resuspendiert. Diese positive Fraktion kann mittels Durchflusszytometrie oder einer beliebigen Analysemethode Ihrer Wahl quantifiziert werden.

Nach der Inkubation wird die Probe in eine Einwegkartusche überführt. Zusätzlich wird der Waschpuffer in die Kartusche pipettiert.

Die Kartusche wird dann in die Kartuschenkammer des CellStream-Geräts eingesetzt. Ein Magnetfeld und Vakuumpumpen schaffen die für die schnelle und effektive Probenaufbereitung nötige Umgebung.

Im mikrofluidischen Kanal in der Mitte der Kartusche findet die immunmagnetische Separation statt. Während des Prozesses werden die aufgereinigten und konzentrierten Zielzellen auf die rechte Seite der Kartusche transferiert und in sauberem Puffer eluiert, während der Rest der Probe der Abfallfraktion zugeführt wird.

Durchflusszytometrie

Die Probenaufbereitung mit dem Verfahren von rqmicro kann mit jeder analytischen Methode Ihrer Wahl, wie z.B. PCR, dem Kultivieren von Zellen auf Agarplatten, Fluoreszenzmikroskopie, etc., kombiniert werden. Die schnellste und präziseste Detektionsmethode ist die Durchflusszytometrie (DZ). Daher sind die Produkte von rqmicro so konzipiert, dass sie Ihrem laboreigenen Durchflusszytometer ermöglichen, zuverlässige und schnelle Ergebnisse zu liefern.

Die Durchflusszytometrie ist eine laserbasierte, elektronische Zellzähltechnologie, die die multiparametrische Analyse von Tausenden von Zellen pro Sekunde ermöglicht. Die mit einem Fluoreszenzfarbstoff markierten Zellen passieren den Laserstrahl in einem Flüssigkeitsstrom. Der Laser regt die Elektronen im Fluoreszenzfarbstoff energetisch an, worauf diese jeweils in Sekundenbruchteilen durch Lichtemission wieder in ihren ursprünglichen Energiezustand zurückkehren. Das DZ erkennt dieses Lichtsignal und wandelt es in Daten um, die vom Computer mit Hilfe einer speziellen Software analysiert werden.

Da es sich um eine kultivierungsunabhängige Methode handelt, werden alle fluoreszenzmarkierten Zellen in einer Probe, auch lebensfähige, aber nicht kultivierbare oder tote Zellen (VBNC-Bakterien), mittels DZ in wenigen Minuten quantifiziert. Die Zellpopulationen können durch den Einsatz verschiedener Fluoreszenzfarbstoffe unterschieden werden.

Tutorial Durchflusszytometrie

Nach der immunomagnetischen Separation wird die positive Fraktion in frische Röhrchen überführt. Falls eine Viabilitätsanalyse von Interesse ist, kann die Hälfte der Probe in ein frisches Röhrchen transferiert und der rqmicro Viabilitäts-Farbstoff hinzugefügt werden.

Die Probe ist jetzt bereit für die Analyse mit dem Durchflusszytometer. Je nach Instrument können die Proben im Röhrchen-Modus oder auch in 96-Well-Platten analysiert werden.

Die Total- und Lebendzellzahl der Zielzellen kann innerhalb weniger Minuten ermittelt werden. Die Zielzell-Population wird üblicherweise in einem Punkt-Diagramm dargestellt.